АНАЛИЗ ПРОЦЕССОВ НЕЙРОГЕНЕЗА В ГОЛОВНОМ МОЗГЕ МЫШЕЙ В МОДЕЛИ БОЛЕЗНИ АЛЬЦГЕЙМЕРА ПОСЛЕ ТРАНСПЛАНТАЦИИ МОНОНУКЛЕАРНЫХ КЛЕТОК ПУПОВИННОЙ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ 4
ВВЕДЕНИЕ 5
1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 7
1.1. Механизмы болезни Альцгеймера 7
1.1.1. Амилоидная каскадная гипотеза о происхождении БА 8
1.1.2. Метаболизм APP – белок предшественник β-амилоида 9
1.1.2. Физиологические функции β-амилоида.Ошибка! Закладка не определена.
1.2. Процессы нейрогенеза в головном мозге. 11
1.2.1. Нейрогенез при болезни Альцгеймера 13
1.2.2. Нейрогенез и стволовые клетки 16
1.3. Стратегии лечения БА в соответствии с рядом существующих гипотез. 18 1.3.1. Холинергическая гипотеза 18
1.3.2. Дендритная гипотеза 20
1.3.3 Метаболическая гипотеза 22
Влияние МКПК на нейрогенез в гиппокампе старых крыс. 24
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ 26
2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 26
2.1. Иммунофлуоресцентное окрашивание 28
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ 29
3.1. Экспрессия маркера нейрональных стволовых и прогениторных клеток (нестин) в гиппокампе мышей с моделью болезни Альцгеймера 29
3.2. Экспрессия нестина и в зубчатой извилине на девятые сутки после трансплантации МКПК, экспрессирующих EGFP и GDNF. 30
3.3. Экспрессия нестина и в зубчатой извилине на сорок восьмые сутки после трансплантации МКПК, экспрессирующих EGFP и GDNF. 33
3.4. Экспрессия нестина и в СА1 зоне гиппокампа на девятые сутки после трансплантации МКПК, экспрессирующих EGFP и GDNF. 36
3.5. Экспрессия нестина и в СА1 зоне гиппокампа на сорок восьмые сутки после трансплантации МКПК, экспрессирующих EGFP и GDNF. 39
3.6. Экспрессия нестина и в СА3 зоне гиппокампа на девятые и сорок восьмые сутки после трансплантации МКПК, экспрессирующих EGFP и GDNF 42
3.7. Количество нестин-позитивных клеток в зубчатой извилине на 9 и 48 сутки после трансплантации МКПК 45
ВЫВОДЫ 47
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 48

ВВЕДЕНИЕ

Болезнь Альцгеймера – это нейродегенеративное заболевание, которое характеризуется прогрессирующим снижением когнитивных функций, в первую очередь, памяти, развитием поведенческих расстройств и приводит к смерти в течение от 3 до 9 лет после установления диагноза.
Болезнь Альцгеймера – четвертая по значимости ведущая причина смерти в развитых странах. Это самая частая причина развития деменции и одно из самых распространенных заболеваний пожилого возраста. Ежегодно на медицинское обслуживание пациентов с болезнью Альцгеймера затрачивается от 40 до 78 миллиардов долларов [Alzheimer's A., 2013].
Наиболее перспективным направлением для лечения заболевания является применение генно-клеточных технологий. В качестве носителей терапевтических генов нами использованы мононуклеарные клетки пуповинной крови (МКПК) человека. Аденовирусный вектор, примененный для трансфекции стволовых клеток, безопасен по своим репликативным, инфекционным, иммуногенным и онкогенным свойствам.
...

1.1.1. Амилоидная каскадная гипотеза о происхождении БА

Согласно этой гипотезе, основополагающим событием, ведущим к БА является образование белка – β-амилоида. Сама по себе эта молекула очень мала, и не является болезнетворной, при условии, что она химически неактивна. Аβ-пептид обладает особым свойством – способностью к самоагрегации сначала в олигомеры, а затем в амилоидные бляшки. Внутри такой бляшки огромное количество β-амилоида, и каждая отдельная молекула химически активна, т.к. она содержит в себе металл переменной валентности (т.е. она может как принимать, так и отдавать электрон). Еще одно свойство – устойчивость к разрушающему действию ферментов легко расщепляющих неамилоидные структуры [Kubo et al., 2002].
Нейроны могут быть очень большими, простираясь вместе с аксонами и дендритами на расстояние в десятки сантиметров. По микротрубочкам внутри нейронов транспортируются питательные вещества и клеточные регуляторы.
...

1.1.2. Метаболизм APP – белок предшественник β-амилоида

Аβ-пептид – это низкомолекулярный белок, компонент амилоидных отложений, известных как внеклеточные сенильные бляшки, которые вызывают медленную дегенерацию нейронов в мозге при БА [Robakis, 1994; Shoji et al., 1992].
β-Амилоид – это обычный компонент здорового организма, который в низких концентрациях оказывает нейропротекторное действие. Однако, при БА происходит нарушение метаболизма β-амилоида, приводящее к его чрезмерному накоплению и образованию цитотоксичных фибрилл [Kubo et al., 2002].
APP – это высокомолекулярный трансмембранный гликопротеид типа 1, белок, полипептидная цепь которого пересекает мембрану 1 раз. Ген, который кодирует APP, располагается на 21 хромосоме.
...

1.2. Процессы нейрогенеза в головном мозге.

Нейрогенез – это многоэтапный регулируемый процесс, начинающийся с трансформации нейрональных предшественников, нейробластов, проходит стадии пролиферации, миграции, дифференцировки генерируемых структур и заканчивается включением интегрированного в нейрональную сеть «зрелого» нейрона [Гомазков, 2014].
Нейрогенерация проходит в несколько этапов. Образовавшаяся после асимметричного деления стволовых предшественников прогениторная клетка начинает делиться c образованием нейробластов, которые, выстраиваясь в цепочки, тангенциально мигрируют в направлении ольфакторной зоны. Достигнув обонятельной луковицы, нейробласты трансферируются уже радиально к месту конечного назначения [Гомазков, 2014].
Образование новых нервных клеток, олигодендроцитов, астроцитов в результате трансформации эндогенных стволовых клеток происходит в течение всей жизни. Этот процесс служит основой обеспечения пластической функции мозга и регулируется многими факторами.
...

1.2.1. Нейрогенез при болезни Альцгеймера

Нейродегенеративные процессы при болезни Альцгеймера начинаются с повреждения синапсов и аксонов в результате аккумуляции токсических продуктов Аβ в экстра- и интрацеллюлярном пространстве клеток [Wallace T. L et al., 2013].

В модели на трансгенных мышах фенотипа APP/PS1 установлено, что развитие заболевания ассоциируется с нарушением нейрогенеза. Результаты, полученные на этой модели, показали, что у мышей с многочисленными отложениями Аβ увеличена пролиферация прогениторных клеток гиппокампа. Число гиппокампальных BrdU-позитивных клеток, существенно увеличивалось у мышей с прогрессивной стадией заболевания [Yu Y et al., 2009].
Немало данных подтверждают, что АРР может существенно влиять на пролиферацию нейральных прогениторов и последующие этапы их трансформации. Эти процессы контролируются на уровне транскрипторной активности определенных генов.
...

1.2.2. Нейрогенез и стволовые клетки

Нейрогенез понимается как многоступенчатый регулируемый процесс, который начинается с трансформации нейрональных предшественников, нейробластов, проходит стадии пролиферации, миграции, дифференцировки генерируемых структур и заканчивается включением интегрированного в нейрональную сеть «зрелого» нейрона [Smith, 1997].
Нейрогенез, т.е. образование новых нейронов, олигодендроцитов, астроцитов в результате трансформации эндогенных стволовых клеток происходит в течение всей жизни. Этот процесс служит основой обеспечения пластической функции мозга и регулируется многими факторами [Mu Y et al.,2011].
Одним из перспективных направлений исследования – это влияния на нейрогенез фармакологическими или трансплантационными приемами для лечения нейральных и психических заболеваний.
Для этих целей мы предлагаем использование модифицированных мононуклеарных клеток пуповинной крови, сверхэкспрессирующих ростовые и трофические факторы GDNF.
...

1.3.2. Дендритная гипотеза

Дендритные аномалии появляются на относительно ранних стадиях БА. Дистрофические невриты, дендритные потери позвоночника - это основа молекулярных изменений, которые происходят в постсинаптических окончаниях и в дендритах [Cochran J et al., 2014].
Некоторые данные свидетельствуют о том, что растворимые олигомеры Аβ являются основными нейротоксическими видами, ответственными за дендритные патологии. Аβ олигомеры могут быть причиной отклонений в рецепторах N-метил-D-аспартата (NMDAR), например, активацию постсинаптическим путем комплексов с белком и клеточной поверхности приона (PrPc). PrPC имеет нейронные постсинаптические плотности, где происходит взаимодействие с Финтирозинкиназой-метаботропным рецептором комплекса (Фин-mGluR5). Активация происходит, когда Aβ связан с комплексом PrPC-Фюн-mGluR5. Активация, может привести к фосфорилированию тирозина NR2B субъединицы NMDAR. Это приводит к потере клеточной поверхности NMDARs .
...

1.3.3 Метаболическая гипотеза

Клинические исследования показывают, что диабет является основным фактором риска, который вносит свой вклад в паталогию БА. Результаты опубликованных исследований свидетельствуют о том, что существует тесная связь между инсулин-зависимым диабетом и церебральным амилоидозом [De Felice F et al 2013].
Нарушение периферической и центральной сигнализации инсулина, вероятно, присутствует в обоих заболеваниях. В результате был разработана гипотеза БА "3 тип диабета", которая пытается предупредить наблюдаемые метаболические фенотипы, присутствующие при диабете и БА в согласованные рамки. Инсулин - гормон, который играет центральную роль этой гипотезе [Lourenco M. et al., 2015].
...

Влияние МКПК на нейрогенез в гиппокампе старых крыс.

Существуют данные, что МКПК человека старым крысам может способствовать улучшению нейрогенного пространство мозга взрослого человека и побудить эндогенные стволовые клетки / клетки- предшественники к образованию новых нейронов. По результатам стереологических анализов даблкортина и бромдезоксиуридина установлено, что однократная инъекция МКПК стимулирует образование нервных клеток. Тот факт, что введение МКПК повысило количество клеток, образованных в течение суток вскоре после лечения, указывает на то, что повышение нейрогенеза, может являться скорее следствием разрастания клеток, чем изменениями в их дифференцировке или выживаемостью новообразованных клеток [Imbimbo B et al., 2013].
В продолжение этой гипотезы было выявлено, что МКПК могли повысить производство клеток у взрослых крыс как минимум на 15 дней. Это позволяет сделать вывод о том, что МКПК могут оказывать положительный эффект на микросреду взрослого мозга.
...

2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Заготовку пуповинной крови человека проводили после получения информированного согласия у беременной и дородового скрининга на наличие противопоказаний к донорству пуповинных клеток. Кровь собирали в пластиковые контейнеры CPDA-1 250 GG (Terumo) и доставляли в Банк стволовых клеток Казанского государственного медицинского университета (КГМУ), где из неё выделяли мононуклеарную фракцию с помощью центрифугирования в градиенте плотности фиколла. Полученные клетки ресуспензировали в среде DMEM, к которой были добавлены сыворотка крови плодов коровы (10%), L-глутамин (2 мМ), смесь антибиотиков пенициллина и стрептомицина (1%) (Sigma, США). Для генетической модификации клетки трансдуцировали рекомбинантными аденовирусами, экспрессирующими ген EGFP или GDNF (10 бляшко-образующих единиц на клетку). UCBMC культивировали 14-16 часов в 10 см культуральных чашках при 37 °С в условиях термостатирования с поддержанием 5% уровня СО2 во влажной атмосфере.
...

3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Экспрессия маркера нейрональных стволовых и прогениторных клеток (нестин) в гиппокампе мышей с моделью болезни Альцгеймера.

Для оценки процессов нейрогенеза исследовали характер и интенсивность экспрессии нестина, маркера нейрональных стволовых и прогениторных клеток, в гиппокампе мышей с моделью БА на девятые и сорок восьмые сутки после трансплантации МКПК, экспрессирующих EGFP (группа «Alz-EGFP») и GDNF (группа «Alz-GDNF»). Изучались следующие зоны гиппокампа: зубчатая извилина, CA1 и CA3. Полученные результаты сравнивали с показателями мышей дикого типа (группа «WT») и мышей c моделью БА, не получивших лечения (группа «Alz»).
Нестин – маркер прогениторных клеток, находящихся на стадии пролиферации.
...

3.2. Экспрессия нестина и в зубчатой извилине на девятые сутки после трансплантации МКПК, экспрессирующих EGFP и GDNF.

В зубчатой извилине гиппокампа у мышей с моделью БА средняя плотность свечения нестина была достоверно ниже, чем у мышей дикого типа того же возраста. В группе «Alz-EGFP» средняя плотность свечения нестина была достоверно выше чем у группы «Alz». В группе «Alz-GDNF» средняя плотность свечения не отличалась от мышей с БА, не получивших лечения (Рисунок 1).
Иммунореактивность к нестину в группе «WT» была наибольшей в субгранулярной зоне, при этом отмечались длинные нестин-позитивные отростки, которые углублялись в гранулярный слой. В группе мышей с моделью БА нестин-позитивные клетки были локализованы субранулярном и гранулярном слое, здесь отмечались клетки обоих типов.
У групп «Alz-EGFP» и «Alz-GDNF» нестин-позитивные клетки были сконцентрированны в субгранулярной зоне и хилусе зубчатой извилины.
...

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


1) Гомазков, О.А. Нейрогенез как адаптивная функция мозга [Текст] / М. : МЕДпресс-информ, 2014 3-е изд. - С. 52-58.
2) Каминский, Ю. Г. Популярно и не очень о болезни Альцгеймера [Текст, Изоматериал] / Ю. Г. Каминский, Е. А. Косенко - М. : Книжный дом «ЛИБКОМ», 2009. – 136с. - ISBN 978-5-397-00194-6.
3) Левин, О. С. Диагностика и лечение деменции в клинической практике [Текст] / М. : МЕДпресс-информ, 2012. 3-е изд. 256с. - ISBN 978-5- 98322-818-4.
4) Мухамедьяров, М. А. Влияние бета-амилоидного пептида на функции возбудимых тканей: физиологические и патологические аспекты [Текст]
/ М. А. Мухамедьяров, А. Л. Зефиров // Успехи физиологических наук. - 2013. – Т. 44. № 1. - С. 55-71.
5) Ризванов, А.А. Генно-клеточная терапия бокового амиотрофического склероза мононуклеарными клетками пуповиной крови человека, сверхэкспессирующими гены нейронной молекулы адгезии L1cam и сосудистого эндотелиального фактора роста vegf [Текст] / А.А. Ризванов, Д.С. Гусева // Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. -2010.
6) К.Н. Ярыгин, В. Н. Ярыгин. Нейрогенез в центральной нервной системе и перспективы регенеративной неврологии. [Текст] Журнал неврологии и психиатрии им. С. С. Корсакова. 2012. Том 112, N 1. С. 4 - 13.
7) Aiello, L. P. Vascular endothelial growth factor in ocular fluid of patients with diabetic retinopathy and other retinal disorders [Text] / L. P. Aiello // N Engl J Med. - 1994. - V. 331(22). - P. 1480-7.
8) Akiyama, H. Inflammation and Alzheimer's disease [Text] / H. Akiyama, S. Barger, S. Barnum, et al. // Neurobiol Aging. - 2000. - V. 21. - P. 383-421.

9) Alzheimer's A. Alzheimer's disease facts and figures [Text] / Alzheimer's Association. // Alzheimers Dement. - 2013. - V. 9. - P. 208-45.
10) Broxmeyer, H. E. Human umbilical cord blood as a potential source of transplantable hematopoietic stem progenitor cells [Text] / H. E. Broxmeyer.
// Proc Natl Acad Sci U S A. - 1989. - V. 86(10). - P. 3828-32.
11) Chen, J. Intravenous administration of human umbilical cord blood reduces behavioral deficits after stroke in rats [Text] / J. Chen. // Stroke. - 2001. - V. 32(11). - P. 2682-8.
12) Cirton, M. Evidence that Ab42 and Ab40 are generated from the b-amyloid precursor protein by different protease activities [Text] / M. Cirton, T.S. Diehl, et al. // Proc. Natl Acad. Sci. USA. - 1993. - P. 13170–13175.
13) Cook, D. G. Reduced hippocampal insulin-degrading enzyme in late-onset Alzheimer's disease is associated with the apolipoprotein E-epsilon4 allele [Text] / D. G. Cook, J. B. Leverenz, P. J. McMillan, et al. // Am J Pathol. - 2003. - V. 162. - P. 313-319.
14) Craft, S. Cerebrospinal fluid and plasma insulin levels in Alzheimer's disease: relationship to severity of dementia and apolipoprotein E genotype [Text] / S. Craft, E. Peskind, M. W. Schwartz, et al. // Neurology. - 1998. - V. 50. - P. 164-168.
15) Garbuzova-Davis, S. Intravenous administration of human umbilical cord blood cells in a mouse model of amyotrophic lateral sclerosis: distribution, migration, and differentiation [Text] / S. Garbuzova-Davis // J Hematother Stem Cell Res. - 2003. - V. 12(3). - P. 255-70.
16) Giuffrida, M. L. Beta-amyloid monomers are neuroprotective [Text] / M. L. Giuffrida, F. Caraci, B. Pignataro // J. Neuroscience. - 2009. - V. 29. № 34. - P. 10582–7.
17) Gluckman, E. Hematopoietic reconstitution in a patient with Fanconi's anemia by means of umbilical-cord blood from an HLA-identical sibling [Text] / E. Gluckman // N Engl J Med. - 1989. - V. 321(17). - P. 1174-8.

18) Gomez-Isla, T. Neuronal loss correlates with but exceeds neurofibrillary tangles in Alzheimer's disease [Text] / T. Gomez-Isla, R. Hollister, H. West // Ann Neurol. - 1997. - V. 41. - P. 17-24.
19) Hachinski, V. National Institute of Neurological Disorders and Stroke- Canadian Stroke Network vascular cognitive impairment harmonization standards [Text] / V. Hachinski, C. Iadecola, R. C. Petersen, et al. // Stroke. - 2006. - V. 37. - P. 2220-2241.
20) Hardy, J. The amyloid hypothesis of Alzheimer’s disease: progress and problems on the road to therapeutics [Text] / J. Hardy, D. J. Selkoe // Science.
- 2002. - V.297. - P. 353-356.
21) Hauptmann, S. Mitochondrial dysfunction in sporadic and genetic Alzheimer's disease [Text] / S. Hauptmann, U. Keil, et al. // Exp Gerontol. - 2006. - V. 41. - P. 668-673.
22) Iqbal, K. Tau pathology in Alzheimer disease and other tauopathies [Text] /
K. Iqbal, C. Alonso Adel, et al. // Biochim Biophys Acta. - 2005. - V. 1739. - P. 198-210.
23) Kamenetz, F. APP processing and synaptic function [Text] / F. Kamenetz, T. Tomita, H. Hsieh, et al. // Neuron. - 2003. - V. 37. - P. 925-937.
24) Kaneko, I. Suppression of mitochondrial succinate dehydrogenase, a primary target of beta-amyloid, and its derivative racemized at Ser residue [Text] / I. Kaneko, N. Yamada, et al. // J Neurochem. - 1995. - V. 65. - P. 2585–2593.
25) Kang, J. The precursor of Alzheimer’s disease amyloid A4 protein resembles a cell-surface receptor [Text] / J. Kang, H. G. Lemaire, et al. // Nature. - 1987.
- V. 325. - P. 733-736.
26) Kayed, R. Common structure of soluble amyloid oligomers implies common mechanism of pathogenesis [Text] / R. Kayed, E. Head, J. L. Thompson, et al.
// Science. - 2003. - V. 300. - P. 486-489.
27) Keller, J. N. 4-Hydroxynonenal, an aldehydic product of membrane lipid peroxidation, impairs glutamate transport and mitochondrial function in

synaptosomes [Text] / J. N. Keller, R. J. Mark // Neuroscience. - 1997. - V. 80. - P. 685-696.
28) Kubo, T. In vivo conversion of racemized beta-amyloid ([D-Ser 26]A beta 1-
40) to truncated and toxic fragments ([D-Ser 26]A beta 25-35/40) and fragment presence in the brains of Alzheimer's patients [Text] / T. Kubo, S. Nishimura, et al. // J Neurosci Res. - 2002. - V. 70. - P. 474-483.
29) LaFerla, F. M. Calcium dyshomeostasis and intracellular signalling in Alzheimer's disease [Text] / F. M. LaFerla // Nat Rev Neurosci. - 2002. - V. 3.
- P. 862-872.
30) Larson, J. Alterations in synaptic transmission and long-term potentiation in hippocampal slices from young and aged PDAPP mice [Text] / J. Larson, G. Lynch, et al. // Brain Res. - 1999. - V. 840. - P. 23-35.
31) Levi Montalcini, R. The nerve growth factor 35 years later [Text] / R. Levi Montalcini // Science. - 1987. - V. 237. - P. 1154-1162.
32) Ling, Y. Amyloid precursor protein (APP) and the biology of proteolytic processing: relevance to Alzheimer's disease [Text] / Y. Ling, K. Morgan, et al. // Int. J. Biochem. Cell. Biol. - 2003. - V. 35. - P. 1505-1535.
33) Lopez Salon, M. Defective ubiquitination of cerebral proteins in Alzheimer’s disease [Text] / M. Lopez Salon, L. Morelli, E. M. Castano, et al. // J Neurosci Res. - 2000. - V. 62. - P. 302-10.
34) Lopez-Perez, E. Proprotein convertase activity contributes to the processing of the Alzheimer's beta-amyloid precursor protein in human cells: evidence for a role of the prohormone convertase PC7 in the constitutive alpha- secretase pathway [Text] / E. Lopez-Perez, N. G. Seidah, et al. // J. Neurochem. - 1999. - V. 73. - P. 2056-2062.
35) Mark, R. J. Amyloid beta-peptide impairs glucose transport in hippocampal and cortical neurons: involvement of membrane lipid peroxidation [Text] / R. J. Mark, Z. Pang, et al. // J Neurosci. - 1997. - V. 17. - P. 1046-1054.
36) Markina, N. V. Behavioral screening of two mouse lines selected for different brain weight [Text] / N. V. Markina, R. M. Salimov, et al. // Prog.

Neuro-Psychopharmacology and Biol. Psychiatry. - 2001. - V. 25. - P. 1083- 1109.
37) Matsumoto, K. Interleukin 10 and interleukin 13 synergize to inhibit vascular permeability factor release by peripheral blood mononuclear cells from patients with lipoid nephrosis [Text] / K. Matsumoto // Nephron. - 1997. - V. 77(2). - P. 212-8.
38) Messier, C. The role of insulin, insulin growth factor, and insulin-degrading enzyme in brain aging and Alzheimer's disease [Text] / C. Messier, K. Teutenberg // Neural Plast. - 2005. - V. 12. - P. 311-328.
39) Miller, D. L. Peptide compositions of the cerebrovascular and senile plaque core amyloid deposits of Alzheimer's disease [Text] / D. L. Miller, et al. // Arch Biochem Biophys. - 1993. - V. 301. - P. 41-52.
40) Morgan, D. Aβ peptide vaccination prevents memory loss in an animal model of Alzheimer's disease [Text] / D. Morgan, D. M. Diamond, et al. // Nature. - 2000. - V. 408. - P. 982–985.
41) Mungarro-Menchaca, X. beta-Amyloid peptide induces ultrastructural changes in synaptosomes and potentiates mitochondrial dysfunction in the presence of ryanodine [Text] / X. Mungarro-Menchaca, P. Ferrera, et al. // J Neurosci Res. - 2002. - V. 68. - P. 89-96.
42) Nagahara, A. H. Neuroprotective effects of brain-derived neurotrophic factor in rodent and primate models of Alzheimer's disease [Text] / A. H. Nagahara, D. A. Merrill, et al. // Nat Med. - 2009. - V. 15. - P. 331-337.
43) Nakahata, T. Hemopoietic colony-forming cells in umbilical cord blood with extensive capability to generate mono- and multipotential hemopoietic progenitors [Text] / T. Nakahata, M. Ogawa // J Clin Invest. - 1982. - V. 70(6). - P. 1324-8.
44) Paris, D. Impaired angiogenesis in a transgenic mouse model of cerebral amyloidosis [Text] / D. Paris, N. Patel, et al. // Neurosci Lett. - 2004. - V. 366. - P. 80-85.

45) Pearson, H. A. Physiological roles for amyloid beta peptides [Text] / H. A. Pearson, C. Peers // J. Physiology. - 2006. - V. 575. - P. 5–10.
46) Roberson, E. D. Reducing endogenous tau ameliorates amyloid beta-induced deficits in an Alzheimer's disease mouse model [Text] / E. D. Roberson, K. Scearce-Levie, et al. // Science. - 2007. - V. 316. - P. 750-754.
47) Robert, M. J. T-maze alternation in the rodent [Text] / M.J. Robert, Nicholas et al. // Nature protocols. - 2006. - V. 1. - P. 7-12.
48) Rogaeva, E. The Genetic Profile of Alzheimer's Disease [Text] / E. Rogaeva
// Geriatrics and Aging. - 2008. - V. 1. - P. 577-581.
49) Roher, A. E. Atherosclerosis of cerebral arteries in Alzheimer disease [Text]
/ A. E. Roher, C. Esh, et al. // Stroke. - 2004. - V. 35. - P. 2623-2627.
50) Salimov, R. M. Performanse in the cross-maze and slip funnel tests of four pairs of rat lines selectively bred for divergent alcohol drinking behavior [Text] / R. M. Salimov, W. J. McBride, et al. // Addict. Biol. - 1996. - V. 1. - P. 273-280.
51) Selkoe, D. J. Amyloid beta-protein and the genetics of Alzheimer’s disease [Text] / D. J. Selkoe // J. Biol. Chem. - 1996. - V. 271. № 31. - P. 18295–8.
52) Smith, M. A. Widespread peroxynitrite-mediated damage in Alzheimer's disease [Text] / M. A. Smith, P. L. Richey Harris, et al. // J Neurosci. - 1997. - V. 17. - P. 2653-2657.
53) Walsh, D. M. Certain inhibitors of synthetic amyloid beta-peptide (Abeta) fibrillogenesis block oligomerization of natural Abeta and thereby rescue long-term potentiation [Text] / D. M. Walsh, M. Townsend, et al. // J Neurosci. - 2005. - V. 25. - P. 2455-2462.
54) Yang, S. P. Co-accumulation of vascular endothelial growth factor with β- amyloid in the brain of patients with Alzheimer’s disease [Text] / S. P. Yang,
D. G. Bae, et al. // Neurobiology of Aging. - 2004. - V. 25. - P. 283–290.
55) Yu Y. Increased hippocampal neurogenesis in the progressive stage of Alzheimer's disease phenotype in an APP/PS1 double transgenic mouse

model. Hippocampus. [Text] / D He J, Zhang Y et al. // J Neurosci Res. - 2009; 19(12):1247-5.