Автор сделал все очень грамотно, на вопросы выслал учебный материал, ответил на все комментарии к заказу. Спасибо за сотрудничество!
Информация о работе
Подробнее о работе
СПЕКТРОСКОПИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ ФЛУОРЕСЦЕНТНЫХ НАНОМАРКЕРОВ СЕМЕЙСТВА ФЛУОРЕСЦЕИНА С АЛЬБУМИНОМ ЧЕЛОВЕКА
- 62 страниц
- 2022 год
- 0 просмотров
- 0 покупок
Гарантия сервиса Автор24
Уникальность не ниже 50%
Фрагменты работ
Введение
Использование методов оптики и спектроскопии для исследовательских задач биологических систем является одной из важнейших задач современной физики. В настоящее время оптико-спектральные методы широко применяются для исследования функций и структуры биологических молекул, например, компонентов крови.
Объектом исследования в данной работе является сывороточный альбумин человека. Сывороточный альбумин человека представляет собой глобулярный белок, выполняющий в плазме крови транспортные функции. Многие лекарственные препараты в кровеносном русле связываются с альбумином.
Анализ механизма связывания сывороточного альбумина человека с различными лигандами чрезвычайно интересен с точки зрения биомедицины.
При этом широко используются флуоресцентные наномаркеры. Для исследования белков плазмы крови обычно используются анионные наномаркеры (при физиологическом значении рН 7,4) – такие как эозин, флуоресцеин и эритрозин, принадлежащие к одному гомологическому ряду производных флуоресцеина.
Основой взаимодействий молекулы сывороточного альбумина человека с лигандами является структурная подвижность этой белковой молекулы, обеспеченная уникальной петлевой укладкой единственной полипептидной цепи белка из 585 аминокислотных остатков. Вторичная структура сывороточного альбумина человека состоит из-спиральных участков и участков хаотической укладки: например при физиологическом значении pH около 50 – 67 % аминокислотных остатков уложены в-спирали. В неспирализованных участках белковая цепь изгибается. Между остатками цистеина в сывороточном альбумине человека образуются 17 дисульфидных связей, которые формируют 9 петель.
В результате гидрофобных взаимодействий каждые три выше указанные петли образуют глобулярную структуру. Такая структурная единица альбумина называется доменом. Молекула сывороточного альбумина человека состоит из 3 практически одинаковых доменов. На сегодняшний день преобладает модель «сердца» третичной структуры альбумина, домены в этой модели расположены под углом друг к другу.
При связывании лигандов в молекуле сывороточного альбумина человека происходят конформационные перестройки, которые могут быть довольно значительными. Конформационные перестройки возможны как во всей молекуле альбумина, так и только в связывающей области.
КР - спектроскопия обширно применяется в биологических и медицинских исследованиях. Именно КР – спектроскопия ближней инфракрасной области позволяет исследовать механизм связывания данных наномаркеров с белком.
Данная работа посвящена исследованию флуоресцентных характеристик наномаркеров семейства флуоресцеина в растворах сывороточного альбумина человека при различных значениях pH. Также в работе определены константы химического связывания наномаркеров семейства флуоресцеина с сывороточным альбумином человека при различных значениях pH. Методом КР – спектроскопии в работе исследованы изменения вторичной структуры сывороточного альбумина человека при связывании им наномаркеров семейства флуоресцеина при различных значениях pH.
Результаты исследования спектроскопическими методами связывания наномаркеров с сывороточным альбумином человека при различных значениях рН представляют интерес не только с точки зрения оптико-спектральных методов изучения сложных макромолекулярных систем, но и с точки зрения прикладных биологических задач.
Оглавление
Введение………………………………………………...…….….…….4
Глава 1. Применение спектроскопических методов в исследованиях структуры и свойств белков (литературный обзор).………………………6
§1.1. Физические основы флуоресцентной спектроскопии……………..…..…6
§1.2. Тушение флуоресценции. Уравнение Штерна – Фольмера………....….8
§1.3. Основы спектроскопии комбинационного рассеяния…………………..11
§1.4. Наномаркеры семейства флуоресцеина………………………………….14
§1.5. Применение флуоресцентной спектроскопии и КР – спеткроскопии в исследованиях белковых макромолекул………………………………..…….. 17
Глава 2. Методическая часть эксперимента………………………………22
§2.1. Приготовление растворов сывороточного альбумин человека и наномаркеров для изучения констант связывания наномаркеров с белком методом флуоресцентной спектроскопии ………………………..……………22
§2.2. Приготовление растворов сывороточного альбумин человека и наномаркеров для изучения изменений вторичной структуры белка методом КР - спектроскопии ………………………………………………………….….22 §2.3. Методика экспериментов на флуориметре для исследования констант
связывания наномаркеров с сывороточным альбумином человека…………………..……………………………...……………………….23
§2.4. Методика экспериментов на КР – спектрометре для исследования вторичной структуры сывороточного альбумина человека при связывании им наномаркеров семейства флуоресцеина…………..……………………..……..23
Глава 3. Исследование взаимодействия наномаркеров семейства флуоресцеина с сывороточным альбумином человека (описание собственных результатов и их обсуждение)……………….…………. ……25
§3.1 Исследование флуоресцентных характеристик наномаркеров семейства флуоресцеина в растворах сывороточного альбумина человека при различных значениях pH……………………………………….…………….…25
§3.2 Определение констант химического связывания наномаркеров семейства флуоресцеина с сывороточным альбумином человека при различных значениях pH…………………………………………………..……35
§3.3 Исследование изменений вторичной структуры сывороточного альбумина человека при связывании им наномаркеров семейства флуоресцеина при различных значениях pH…………………………….……48
Основные результаты и выводы……………...…………………..59
Список цитируемой литературы………………………..…………60
Добрый день! Уважаемые студенты, Вашему вниманию представляется дипломная работа на тему: «СПЕКТРОСКОПИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ ФЛУОРЕСЦЕНТНЫХ НАНОМАРКЕРОВ СЕМЕЙСТВА ФЛУОРЕСЦЕИНА С АЛЬБУМИНОМ ЧЕЛОВЕКА»
Список литературы
1. Л.В. Левшин, А.М. Салецкий «Оптические методы исследования молекулярных систем», 1994 год, Издательство Московского университета.
2. Дж. Лакович «Основы флуоресцентной спектроскопии», М.: Мир, 1986.
3. Ю.А. Пентин, Л.В. Вилков «Физичесие методы исследования в химии», 2003 год, Издательство «АСТ».
4. Г.Е. Добрецов, «Флуоресцентные зонды в исследованиях клеток, мембран
и липопротеинов», 1989 год, Издательство «Наука».
5. И.М. Власова, А.М. Салецкий «Кр-спектроскопия в сравнительных исследованиях механизмов связывания трех молекулярных зондов – флуоресцеина, эозина и эритрозина – с сывороточным альбумином человека», Laser Physics Letters, 2008, №11, 834-839.
6. И.М. Власова, Д.В Полянский, Салецкий А.М. «Исследование методом спектроскопии комбинационного рассеяния света механизма связывания сывороточного альбумина человека с молекулярным зондом эозином »,
Laser Physics Letters, 2006, № 5, 390-394.
7. И.М. Власова, А.М. Салецкий «Спектроскопия комбинационного рассеяния света в исследованиях механизма связывания сывороточного альбумина человека с молекулярным зондом флуоресцеином», Laser Physics Letters, 2008, № 5, 384-389.
8. Е.М. Бухарова, И.М. Власова, А.М. Салецкий «Структура молекулярных ассоциатов флуоресцентных зондов в растворах сывороточного альбумина человека», Журнал прикладной спектроскопии, 2008, том 75, №6, 783-788.
9. X. Diaz, E. Aduin, E. Lissi «Quenching of BSA intrinsic fluorescence by
alkylpyridinium cations Its relationship to surfactant-protein association», Journal of Photochemistry and Photobiology, 2002, 157-162.
10. Liliana Birla, Ana-Maria Cristian, Mihaela Hillebrand, «Absorption and
steady state fluorescence study of interaction between eosin and bovine serum albumin», Journal «Spectrochimica Acta», 2003, 551-556.
11. S.M.T. Shaikh, J. Seethamappa, P.B. Kandagal, D.H. Manjunatha, S. Ashoka «Spectroscopic investigations on the mechanism of interaction of bioactive dye with bovine serum albumin», Journal «Dyes and pigments», 2006, 1-6.
12. Sang Hak Lee, Jung Kee Suh,and Ming Li «Determinetion of Bovine Serum Albumin by Its Enhancement Effect of Nile Blue Fluorescence»,Bull. Korean Chem. Soc.,2003, vol. 24,№1, 45-48.
13. Sebnem Ercelen, Andrey S., Klymchenko, Alexandr P. Demchenko «Novel
two-color fluorescence probe with extreme specificity to bovine serum albumin, FEBS Letters, 2002, 25-28.
14. H. Yamini Shrivastava, Balachandran Unni Nair «A fluorescence-based assay
for nanogramquantification of proteins using a protein binding ligand», Original Paper, 2002, 169-174.
15. И.М. Власова, А.М. Салецкий «Флуоресцентные характеристики зондов семейства флуоресцеина в растворах сывороточного альбумина», Вестник Московского университета, Серия 3, № 4, 2009 год, С.52-56.
16. А.Д. Дергунов, Ю.Ю. Воротникова «Взаимодействие сывороточного альбумина с апобелком Е и липопротеидами очень низкой плотности плазмы крови человека», Биохимия. 1993. Т. 58, вып. 6. С. 944-952.
17. А. Г. Мельников, А. М. Салецкий, В. И. Кочубей, А. Б. Правдин, И. С. Курчатов, Г. В. Мельников «Триплет – триплетный перенос энергии между люминесцентными зондами, связанными с альбуминами», Оптика
и спектроскопия, том 109, № 2, 2010, С. 216-221.
18. И.М. Власова, А.Ю. Землянский А.М. Салецкий «Спектрально-люминисцентные характеристики эозина в растворах сывороточного
альбумина человека при его денатурации под воздействием додецилсульфата натрия», Журнал прикладной спектроскопии, 2006, том 73, №5, стр: 661-665.
19. И.М. Власова, А.М. Салецкий «Флуоресценция молекулярного зонда эозина в растворах сывороточного альбумина человека с органическими и неорганическими лигандами», Химическая физика, 2008, том 27, №4, стр:60-64.
20. А.М. Салецкий, А.Г. Мельников, А. Б. Правдин, В.И. Кочубей «Структурные изменения в сывороточном альбумине человека по данным кинетики фосфоресценции люминесцентного зонда - эозина», Журнал прикладной спектроскопии, 2005, том 72, №5, стр:660-663.
Форма заказа новой работы
Не подошла эта работа?
Закажи новую работу, сделанную по твоим требованиям
