спасибо за работу
Информация о работе
Подробнее о работе
Метод гибридизации in situ
- 17 страниц
- 2017 год
- 98 просмотров
- 0 покупок
Гарантия сервиса Автор24
Уникальность не ниже 50%
Фрагменты работ
В настоящее время определение этиологии и патогенеза наследственных заболеваний является актуальной проблемой современной медицинской генетики. Как известно цитогенетические и молекулярные исследования имеют высокую диагностическую информативность и ценность при решении данной проблемы, поскольку хромосомные аномалии встречаются с частотой от 4 до 34% при различных наследственных синдромах. В современной науке появились новые методы цитогенетических и молекулярно-цитогенетических исследований, которые значительно расширили диагностические возможности при заболеваниях, сопровождающихся различными хромосомными нарушениями. В данном реферате дан общий обзор вопросов, рассматривающих методы гибридизации in situ, необходимых цитогенетических или молекулярно-генетических анализов при различных формах генетических синдромов.
Содержание
Введение
1. Молекулярная цитогенетика
2. Метод гибридизации in situ. Основные понятия
3. Принцип FISH-метода
4. Гибридизация in situ . Применение на практике.
5. современные методы цитогенетики.
6.Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH)
7. Применение молекулярно-цитогенетических методов
Заключение
Список использованной литературы
2. Метод гибридизации in situ. Основные понятия
Метод гибридизации in situ* (на месте, лат.) основан на способности ДНК или РНК образовывать устойчивые гибридные молекулы с ДНК / РНК - зондами непосредственно на препаратах фиксированных хромосом и интерфазных ядер. С помощью этого метода можно определить точное местоположение практически любой последовательности ДНК или РНК непосредственно в клетке, клеточном ядре или на хромосомах.
Для проведения гибридизации in situ пригодны цитологические или гистологические препараты клеток любых тканей или органов, приготовленные по стандартным методикам. В условиях клинической цитогенетической лаборатории используют препараты культивированных лимфоцитов периферической крови, клеток цитотрофобласта хорионального эпителия, культивированных и некультивированных клеток амниотической жидкости, различных тканей из абортного материала, а также мазков клеток буккального эпителия и крови.
...
3. Принцип FISH-метода
В основе FISH-метода лежит реакция гибридизации между искусственно созданным ДНК-зондом и комплементраной ему нуклеотидной последовательностью ядерной ДНК. Молекула ДНК представляет собой две спирально соединенные нуклеотидные цепи, а гибридизация возможна только в том случае, если цепи разойдутся. Чтобы разъединить нуклеотидные цепи ДНК прибегают к денатурации (для последующей гибридизации денатурированной должна быть как ДНК в ядрах исследуемого образца, так и сам ДНК-зонд). После денатурации ДНК-зонд гибридизуется с комплементарной ему нуклеотидной последовательностью и может быть обнаружен при помощи флуоресцентного микроскопа.
Рис. 1 Принцип FISH-метода
Таким образом, общий вид протокола для постановки FISH можно представить в следующем виде:
1. Подготовка гистологического или цитологического препарата.
...
4. Гибридизация in situ . Применение на практике.
Среди методов молекулярной цитогенетики основными являются флуоресцентная гибридизация in situ ( FISH –fluorescence in situ hybridization)сравнительная геномная гибридизация , мечение хромосом с помощью полимерной реакции с использованием специфических праймеров (олигонуклеотидов) in situ.
Метод in situ позволяет выявлять отдельные хромосомы или их отдельные участки на препаратах метафазных хромосом или интерфазных ядрах на основе комплементарного взаимодействия ДНК-зонда, конъюгированного с флуоресцентной меткой и искомого участка на хромосоме. Для визуализации на хромосоме пептидно-нуклеиновых соединений применяют PNA-зонды на основе белкового продукта.
...
5. современные методы цитогенетики.
1.флуоресцентная гибридизация in situ (FISH)
2.сравнительная геномная гибридизация(CGH)
3. мечение хромосом с помощью полимеразной реакции с использованием специфических праймеров (PRINS)
4. флуоресцентная гибридизация пептидно – нуклеиновых соединений(PNA)
Цитогенетика: методы
1)Микрометод для хромосомного анализа по Аракаки;
.2) Определение полового хроматина Клетки костного мозга для хромосомного анализа;
3)Изготовление ацетокарминовых препаратов;
4)Колхицинированные митозы у животных;
5) Методика окрашивания корешков, бутонов;
6).Давленные ацетокарминовые препараты;
7)Дифференциальные окраски хромосом
6.Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH)
FISH сочетает в себе преимущества классических цитологических, цитогенетических и новейших молекулярных методов. Подобно классическим методам в гистологии, цитологии и цитогенетике, FISH может проводиться на тканевых, клеточных и хромосомных препаратах.
...
7. Применение молекулярно-цитогенетических методов
Молекулярно-цитогенетическая диагностика является современным направлением в клинической цитогенетике. Целью ее является разработка и применение новых высокоэффективных методов анализа хромосомопатий как в пост-, так и в пренатальный период. Молекулярные исследования (5275) были использованы нами в постнатальной и пренатальной идентификации хромосомных аномалий. Объектами исследования были культивируемые клетки крови детей с умственной отсталостью и врожденными пороками развития (3304) или культивируемые клетки амниотической жидкости и хориона плода беременных женщин (1971).
...
Заключение
Подводя итог сделаем следующий вывод. Разработка методов молекулярно-цитогенетической диагностики дала реальную возможность для идентификации маркерных хромосом и хромосомного мозаицизма в случаях, когда в организме ребенка, помимо нормального, развивается один или несколько клонов аномальных клеток. Среди нозологических форм, сопровождающихся клеточным мозаицизмом, наиболее часто встречаются синдромы аномалий гоносом такие как синдромы Клайнфелтера (кариотип полной формы 47, XXY) и Шерешевского-Тернера (45,Х), дисомии Y (47,ХYY) и трисомии Х (47,ХХХ). Частота полных (немозаичных) форм синдромов составляет в сумме около 4,6 на 1000 новорожденных детей (2,0, 0,4, 1,5 и 0,65 соответственно).
...
1. Гинтер Е.К. Медицинская генетика:Учебник.–М.: Медицина,2003.448с.
2. Ридли М. Геном. Автобиография вида в 23 главах.–М.:Эксмо,2008.432с.
3. Денисенкова Е.В., Петрин А.Н., Байков А.Д. Цитогенетические и молекулярно-цитогенетические аспекты диагностики заболеваний, сопровождающихся умственной отсталостью, у детей//Издательство «Медиа Сфера»,2005.Режим доступа:
http://www.mediasphera.ru/journals/detail/206/2988/
4. Сапиенца К. Геномный импринтинг //В мире науки. (ScientificAmerican. Издание на русском языке).-1990. №12. стр.14-20. Режим доступа: http://www.evolbiol.ru/gen.html
5. Дулипа О.Г. Синдром Прадера-Віллі (Prader-Willi Syndrome). Режим доступа: http://www.ibis-birthdefects.org/start/ ... prader.htm
6. Казанцева Л.З., Новиков П.В., Семячкина А.Н., Николаева Е.А., Курбатов М.Б., Добрыкина Э.В. Московский НИИ педиатрии и детской хирургии Минздрава РФ. Синдром Прадера - Вилли у детей: новое в этиологии, патогенезе и лечении. Режим доступа: http://nature.web.ru/db/msg.html?mid=1174772&uri=index2.html
7. Миронов М.Б., Мухин К.Ю., Кузина Н.Ю., Боровиков К.С., Гоева И.А., Красильщикова Т.М., Коркин А.В., Петрухин А.С. Синдром Ангельмана. Клинический случай. Режим доступа: http://www.epileptologist.ru/pub/Angelman.html
8. Белозеров Ю.В., Леонтьева И.В., Школьникова М. А., Страхова О.С., Себелева И.А., Макаров Л.М., Давыдкин В.В., Динов Б.А. Наследственные болезни сердца у детей // Мир науки и культуры, 2000-2009. Режим доступа: http://nature.web.ru/db/msg.html?mid=1166264&s=111400060
9. Соколов В.Н. Гипопаратериоз // Наука и практика, 2009. Режим доступа:http://www.chtfoms.ru/index.php?option=com_content&task=view&id=26467&Itemid=24
10. Ярцев М.Н., Яковлева К.П., Плахтиенко М.В. ГНЦ Института иммунологии ФМБА России, Москва Иммунодефицитные состояния у детей // Издательство Media Medica, 2000. Режим доступа: http://old.consilium-medicum.com/media/pediatr/06_01/4.shtml
Форма заказа новой работы
Не подошла эта работа?
Закажи новую работу, сделанную по твоим требованиям
